| 产品名称 : | PH1417 | DNA退火缓冲液5× Annealing Buffer for DNA Oligos5× |
| 产品品牌 : | 飞净 PHYGENE |
产品简介：
DNA退火缓冲液即DNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo 的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi（也称siRNA）质粒构建的DNA oligo的退火。该缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆。
本试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。
使用方法（仅供参考）：
1. 把待退火的DNA oligo用无酶水配制成50uM，同时彻底溶解退火缓冲液（5×）备用。
2. 按如下反应体系操作：
|
步骤 |
组份 |
体积 |
|
1 |
无酶水 |
40μl |
|
2 |
退火缓冲液(5×) |
20μl |
|
3 |
DNA oligo A (50μM) |
20μl |
|
4 |
DNA oligo B (50μM) |
20μl |
|
|
Total |
100μl |
按照上述步骤，依次加入对应溶液并混匀，如果使用的PCR仪没有热盖设定，可加入Mineral Oil（矿物油）防止在后续反应中液体挥发，一般5-10ul即可。
3. 按如下设定PCR程序，进行退火：
|
步骤 |
温度 |
时间 |
作用 |
|
1 |
95℃ |
2min |
Oligo 充分变性 |
|
2 |
每90s下降1℃，降至25℃ |
约90min |
程序退火 |
|
3 |
4℃ |
- |
保存 |
注：如果使用的PCR仪无法设定梯度降温功能，也可以选择在经过95℃，2min后，把管子拿出，自然冷却至室温。
4. 反应结束后产物可以直接用于后续实验，如需保存请放于-20℃。
注意事项：
1、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件： 冰袋运输，-20℃保存，有效期24个月
温馨提示：1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
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