PH0417 | DAB显色试剂盒 (20×) / DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit (20×)

Cat No#:：PH0417

Size：2×3mL | 2×10mL

存储：：冰袋运输，-20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可 2-8℃保存。

产品简介

DAB辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后, 还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。

本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。

产品组分

操作步骤（仅供参考）：

1. 对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤 3-5 次，每次 3-5 分钟。

2. 取 900µL PBS（或双蒸水），加入 50µL 溶液 A，50µL 溶液 B 混合均匀，即配成 DAB 工作液。如需要更大体积工作液，可按比例放大。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，1 小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。

3. 向组织切片或印记膜上加入适量 DAB 工作液，确保能充分覆盖样品。

4. 室温避光孵育 3-10 分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。

5. 去除 DAB 染色工作液，用蒸馏水洗涤 2-3 次即可终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：

1. DAB 溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。

2. 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。

3. 显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。

4. DAB 为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触 DAB 的实验用品最好经洗液浸泡 24h 后使用。

常见问题及可能原因

1、背景显色太深

①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封 闭。也应请注意选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

② 在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。可以在 4 体积甲醇中加入 1 体积 3% 过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。

2、没有显色或显色太弱

①当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。