PH1289 | 孚尔根/福尔根DNA染色液（Feulgen Stain）

货号：PH1289

规格：1KIT（50ml+50ml+250ml）

运输与保存：常温运输，参考产品说明。有效期一年。

产品简介

脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有 Feulgen 法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是 Feulgen 法，该法是一种经典的酶组织化学法。

Feulgen Stain 原理在于 DNA 经温和的弱酸(例如HCL)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff 试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有 DNA 的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团，所以凡含有 DNA 的部位就呈紫红色。该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此 RNA 用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明 RNA。

试剂组分

试剂组分 规格 Storage
Schiff Reagent 50ml 4℃ 避光
弱酸工作液 250ml RT
亚硫酸盐溶液 50ml RT

自备材料：蒸馏水、系列乙醇、恒温箱

操作步骤（仅供参考）

(一) 石蜡切片染色

1、 组织固定：Carnoy 固定石蜡切片较好，10%福尔马林亦可，不宜采用 Bouin 固定液。

2、 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

3、 入弱酸工作液，室温浸洗一下。

5、 切片入预热至 60℃的弱酸工作液，孵育 8min。（注意一定要控制好温度不能过高，高了醛基要破坏，低了水解不充分，醛基不能释放出来。水解的时间长短要根据材料，以及固定液的种类而定。根据试验结果，取一个适当时间。）

6、 切片入室温的弱酸工作液中冲洗 1min。

7、 蒸馏水冲洗。

8、 切片入 Schiff Reagent，室温避光染色 30~60min。

9、 在上述染色过程中，配制SO2漂洗液。按弱酸工作液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=5:5:90 配制，即取弱酸工作液 5 份、亚硫酸盐溶液 5 份、蒸馏水 90 份，充分混合（该工作液需即配即用）。

10、 用新鲜配制的SO2漂洗液洗切片 3 次，每次 90s。

11、 蒸馏水中洗净。经系列乙醇脱水。二甲苯透明并封片。

(二) 冰冻切片染色

1、 冰冻切片预处理：取 1 份乙酸、3 份无水乙醇混合即为固定液，固定 10min。

2、 由无水乙醇脱水--逐级下行—蒸馏水。

3、 余下步骤同上述石蜡切片染色。

染色结果

细胞核内DNA： 红紫色

阴性对照

将同样切片经上述步骤， 只有步骤5 改为入室温弱酸工作液，孵育15min。

结果为细胞核DNA 阴性。

注意事项

1、 水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样，参考附表；

2、 注意Schiff Reagent 的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则弃用。

3、 去除切片上多余Schiff Reagent 的方法以SO2水洗为好。

4、 应做阴性对照试验。

附表

Feulgen stain is a staining technique discovered by Robert Feulgen and used in histology to identify chromosomal material or DNA in cell specimens. It is darkly stained. It depends on acid hydrolysis of DNA, therefore fixating agents using strong acids should be avoided.