PH1729 | 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 DPPH

产品简介 

英文名称：DPPH；2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl；1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical；2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl

其他名称：1,1-二苯-2-苦基肼；1,1-二苯基-2-苦味基肼自由基；2,2-联苯基-1-苦基肼基；α, α-二苯基-β-苦基肼基；1,1-二苯-2-苦肼基；2,2-二苯基-1-苦基肼；2,2-二苯基-1-苦肼基

CAS号：1898-66-4

C18H12N5O6=394.32

级别：AR

含量：≥98.0%

熔点：～135℃

性状：黑色粉末，或夹带一些绿色或金色。

用途：生化研究。

保存：常温运输，2～8℃冷藏避光保存，有效期2年

DPPH为暗紫色大棱柱形晶体。mp127～129度（分解）。一般试剂含量不小于97% 该品具有刺激性。吸入、口服或皮肤接触有害。大量使用应穿适当的防护服和戴手套。主要用途是阻聚剂。也常用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价。

DPPH法:DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质好和食品的抗氧化能力。 DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

注意事项 

仅供实验室科研使用！

For laboratory use only. Not for drug, household or other uses.

DPPH is a common abbreviation for the organic chemical compound 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl. It is a dark-colored crystalline powder composed of stable free-radical molecules. DPPH has two major applications, both in laboratory research: one is a monitor of chemical reactions involving radicals, most notably it is a common antioxidant assay, and another is a standard of the position and intensity of electron paramagnetic resonance signals.

疑难解答

问：自由基清除实验为什么选择DPPH和ABTS?
答：因为二者都简单易行，所以，一直沿用。但是，如果结合PTIO自由基清除，则更合理。

问：FRAP法与DPPH和ABTS的区别何在？
答：FRAP是Ferric ion reducing antioxidant power之缩写。该检测法是基于铁离子（Fe3+）还原为亚铁离子（Fe2+）的还原反应，而设计的。所以，整个反应没有自由基参与。FRAP只能反应电子转移能力，不能研究自由基清除的能力。之所以会选用FRAP法，是因为电子转移是自由基清除的一个机制。所以，FRAP法宜结合DPPH•自由基清除、ABTS+•自由基清除、PTIO•自由基清除才有意义。如果某化合物，经能有效地清除DPPH•自由基、ABTS+•自由基和PTIO•自由基，表明该化合物具有自由基清除能力，或者说有抗氧化活性。在此基础上，如果该化合物还能还原Fe3+成为Fe2+离子，说明该化合物的抗氧化活性可能通过电子转移实现。
无疑地，单独使用FRAP法，无法说明某化合物具有抗氧化活性。


问：DPPH实验测量抗氧化性的原理是什么？
答：DPPH法于1958年被提出，广泛用于定量测定生物试样、分类药物和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在519nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有抗氧化剂存在时，DPPH自由基被清除，溶液颜色减淡，其褪色程度与其被清除程度（即吸光度的改变）成定量关系，因而可用分光光度计或酶标仪进行快速的定量分析。


问：DPPH自由基被清除的机制是什么？
答：DPPH自由基的清除过程主要涉及到氢转移（HAT），简要过程如下：

问：实验中的溶剂应该怎么确定？
答：优先选用甲醇、95乙醇或无水乙醇溶解DPPH固体和样品，若样品难溶于水和醇，再考虑DMSO等溶剂。值得注意的是，实验中应该尽量保证样品溶液和DPPH溶液使用相同的溶剂。另两个实验（ABTS+•清除和PTIO•清除）同理。


问：样品的浓度一定要设置成1mg/mL吗？
答：不同样品清除DPPH自由基的活性可能相差很大，为了保证结果的准确，应该尽量使样品的五个浓度点对DPPH•清除率均匀分布在0-100%之间，因此1mg/mL只是一个大概数值，实验中要根据预试结果进行调整。由于1 mg/mL这个数字方便稀释和计算，因此在这里统一写作1mg/mL。另两个实验（ABTS+•清除和PTIO•清除）同理。


问：测量完成后怎么计算IC50？
答：IC50值是指清除50%的自由基，所需要的样品的最终浓度。有两种计算方法。
第一，以实验所得的抗氧化剂浓度为横坐标，清除率为纵坐标，然后计算线性回归方程。将清除率50%代入方程中求得对应的横坐标值即为IC50值，注意最终结果将三次或三次以上的平行试验取平均值。第二，通过浓度曲线的图直接读出。在50%处画一横线，此横线与曲线的模拟线的交点的对应的横坐标，即IC50.
另两个实验（ABTS+•清除和PTIO•清除）同理。


问：为什么要用Trolox作为阳性对照？
答：维生素E（生育酚）是常见的抗氧化剂。不过，维生素E难溶于水，而且易变质。为此，化学家将其结构进行修饰，即得 Trolox（化学名称：6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸）。Trolox不仅溶于水，而且易溶于有机溶剂，所以，广泛地用作抗氧化剂的阳性对照物。亦称水溶性维生素E。为了方便对比评价所测物质的抗氧化能力，通常采用Trolox作为DPPH自由基清除实验的阳性对照品。另两个实验（ABTS+•清除和PTIO•清除）同理。
  当然，除了Trolox外，也可以选用其他化合物作为阳性对照，如BHA, 儿茶素，谷胱甘肽GSH, 维生素C，槲皮素，EGCG等。


问：为什么会出现清除率为负值的情况？
答：样品的活性太弱，所以，加入的样品的量较多；如果这个样本身在519nm处有吸收的话，就会产生一个可观的A值，导致A>A0,清除率为负。


问： DPPH•清除率会大于100%吗？
答：理论上讲，是不可能的。如果出现这种情况，要检测实验本身有没问题。


问：DPPH和ABTS自由基清除率有什么不同？
答：清除率的计算方法大体相同，只不过检测的波长不同，也就是所用的A值不同：DPPH用A519nm值；ABTS用A734nm值。这是因为二者的检测波长本来就不一样。
    尽管这样，对于同样的样品、同样的浓度。DPPH和ABTS自由基清除率，会不同。这是因为，ABTS自由基比DPPH自由基更容易清除。换言之，对于同一个样品而言，清除DPPH的IC50值会大于清除ABTS的IC50值。

DPPH和ABTS对比区别